恐ろしいことに電子書籍の書籍数が１０００を越えてしまった。
漫画が大半やけど、よくも読んだりやね、お金がたまらんわけだわ。
最近は７Seeds読んでまする。
まぁ僕の後輩は優秀な奴らばかりで、多分僕は四天王の中でも最弱なのであった。
そうだなぁ、思考の方向性は多分似ているんだけど、彼のほうがかなり整然としていて、話していると整理してくれるとか、彼は先生として伸びしろがありそうでいいなぁと思います。
僕はかなり長所と短所が密接に絡み合ってるところがあって、型にはまると強いけど、長期的な安定性にかけるのだろうなぁと思います。
人間や研究者個人としてはどうかと思うけど、意外にPIになったら役に立たんやろか。
大抵周りのPI気まぐれな奴ばっかやったで
深く考えると、そんてこともなかったで、みんな優しくて面倒見が良くてキャホウ
読んでへんよなこんなブログ。
まぁPIになるにはもう少し浮世離れしたところをなおさんとね。
嫁さんでもできないかぁ。何処の畑に落ちてるの？竹林？
一片雲だっけかな、中華料理の店行って、ゴージャスによるご飯食べました。
お茶が大変おいしゅうございました。
ま、あいつが難しいと言ってることは、私には出来まい。
いくつか諦めもついたから、論文を粛々と書かないと。
さて、論文が滞ってしまった。
しまったなぁ元ボス忙しいの知っていたら、もう一週間校正したんだけど。
手をいれ始めてるかもしれないけど（願望）、日曜日は再検討してみるかな。
SFNが来週に迫っており、渡米もあるし、もう一本も何とかしないと、CAS9なんかやってる暇なかったんや。
っておもいながら、HRによる変異を考え、Cas9切断部分を中心とした染色体の上流、下流をクローニングすることにしました。
HRはホモロガスリコンビネーションの略で、Cas9による切断が起った時の遺伝子修復機構の擬似テンプレートを与えることにより、変異を持った相同部位を組み込ませ、自分の計画した遺伝子の変異、ノックアウトを行う方法です。
自分でクローニング出来そうだけど、一々シーケンスするのも面倒、コスト的にも人工遺伝子でもいいかなぁと思い、取り敢えず１シリーズ作って見ることにしました。
目的としては遺伝子ノックアウトし、かつ、内因性プロモーター感受的にGFPが発現するようにしたい。
スクリーニングに使えるんじゃないかと。
うまくいきそうならHRベクターの方を改変して、もう少しいろいろな用途に使ったり、クローニングに耐えうるようにしたい。
でも寿命が持たない気もする。
どの制限酵素使おうとか探してたら、実は断片によってライゲーション効率には恐ろしく差があるんやでってTakraのサイトにのってました、げ、知らずに使ってたなぁ
ライゲーション反応は、末端塩基配列の違いにより、反応速度が異なる。一般に次のような傾向がある。
| 突出末端 | ： | Hind III＞Pst I＞EcoR I＞BamH I＞Sal I |
| （Hind III siteはSal I siteより10～40倍速くライゲーションされる） | ||
| 平滑末端 | ： | Hae III＞Alu I＞Hinc II＞Sma I |
| （Hae III siteはSma I siteより5～10倍速くライゲーションされる） | ||
| EcoR V＞Sca I＞Pvu II＞Nru I |
Takraサイトより
ああ、SMAIでなんか苦労した悲しい記憶が蘇ってきた。
まぁでも出来ないわけでもないから、時間をかけるかして頑張ればなんとか。
